És necessari 1 mg de mostra sense dissoldre (preferentment) en vial de vidre nou, acompanyat de la sol·licitud de mostra on es mostri la fórmula molecular, l’estructura i la referència de la mostra. Si la mostra s'entrega dissolta no pot contenir material precipitat, en aquest cas caldria filtrar-la. Per altra banda, cal informar del dissolvent, i si es tracta d'una barreja cal informar, si és possible, dels components d'aquesta.

Pel que fa a la injecció per mitjà de columna, la mostra ha de ser totalment soluble en la fase mòbil i ha d'estar filtrada. Si és necessari l'ús de fases mòbils tamponades aquestes les haurà de proporcionar l'usuari. 

Cal informar de la toxicitat, precaucions d’emmagatzematge i un cop entregat l’informe si no es ve a buscar la mostra al cap d’una setmana, després d’aquest termini el restant d’aquesta serà destruïda. 

• Desgasificador de buit (Degasser G1322A): Velocitat de flux: fins a 10 mL/min. Volum intern: 12 mL per canal.
• Bomba quaternària (Quaternary Pump G1311A): Rang de flux: 0.001–10 mL/min, permet anàlisis amb gradient (columnes amb ID: 3–9.4 mm).
• Mostrejador automàtic per 100 vials de 1.8 mL (ALS G1329A):  Rang d’injecció: 0.1–100 μL.
• Compartiment de columna amb termòstat (TCC G1316A): Rang de temperatures: de 10ºC per sota de temperatura ambient a 80ºC.
• Detector UV-Vis.
• Detector de masses.

La mostra dissolta en la fase mòbil s'introdueix al port d'injecció del cromatògraf. La mostra passa per la columna cromatogràfica gràcies al bombeig de la fase mòbil que és una mescla de dissolvents. La diferent interacció dels anàlits amb la fase mòbil i amb el farciment de la columna permet la separació dels components de la mescla. Aquesta tècnica permet treballar a elevades pressions i això fa incrementar la velocitat lineal dels compostos dins la columna i en redueix la difusió, millorant la velocitat i la resolució de la cromatografia. Es pot treballar de manera isocràtica (sempre amb la mateixa barreja de dissolvents) o es pot fer servir un gradient. També es poden utilitzar tampons per tal de millorar la separació dels compostos. Finalment, els components separats poden ser detectats, i/o caracteritzats i/o quantificats mitjançant diferents tipus de detectors.

Introducció de la mostra

L’UEM disposa d’injector automàtic amb capacitat de fins a 100 vials (vials de 1.8 mL). Cal dissoldre les mostres en dissolvents de puresa HPLC o superior i microfiltrar-les abans de ser mostrejades. Quantitat de mostra injectada entre 0,1 i 100 μL.

Separació cromatogràfica

El compartiment de la columna compta amb un termòstat que pot mantenir constant la temperatura: de 10 graus per sota de la temperatura ambient fins a 80°C (columnes de fins a 30 cm). 

Detectors

L'equip compta amb detectors de masses i d’UV-Vis:

• Detector de longitud d’ona variable (VWD) per anàlisis d’una λ: Registra en continu la longitud d’ona programada de l’eluent de la columna. La font de radiació prové d’una làmpada de descàrrega d’arc de deuteri (rang de longituds d’ona: 190-600nm). A la sortida d'aquest detector es pot connectar en sèrie a un espectròmetre de masses per a extreure informació complementària.
• Detector de masses amb analitzador Trampa Iònica (Bruker Esquire 6000): Permite detectar iones positivos y/o negativos procedentes del eluent de la columna. El rango de masas es de 50 a 3000 m/z y la precisión ±0.2 m/z. El espectrómetro de masas trabaja ionizando la molécula mediante una fuente de iones, y seleccionando e identificando los iones de acuerdo con la relación demasiado/carga (m/z).
  • Este equipo cuenta con dos fuentes de iones, Electrospray (ESI) Source (más suave) y Atmospheric Pressure Chemical Ionization (APCI) Source (permite utilizar flujos más elevados (ya que trabaja a temperaturas más altas) y disolventes no polares; genera más fragmentación).
    Por otra parte, el analizador de trampa iónica permite analizar MSⁿ, es decir, el estudio de las roturas que sufre un ion cuando se le proporciona energía, lo que aporta información estructural y de conectividad de la molécula.
    Además de ser utilizado como detector para el HPLC, se pueden analizar muestras puras o se pueden seguir reacciones introduciendo la muestra de manera directa por infusión mediante una bomba de jeringa de infusión continua.

Las aplicaciones de esta técnica son muchas, ya que permite separar, caracterizar y cuantificar sustancias poco o nada volátiles de diversa naturaleza y procedencia.  La posibilidad de utilizar varios tipos de columnas cromatográficas junto con  la opción de seleccionar diferentes detectores(algunos de ellos se pueden utilizar en serie), hacen que sea posible la extracción de un gran volumen de información permitiendo abordar un abanico muy  amplio de necesidades analíticas.

Especialmente útil es el uso del detector de masas ya que permito caracterizar moléculas puras o caracterizar y cuantificar mezclas de productos cuando se acopla a HPLC. Además, el analizador trampa iónica permite analizar simultáneamente el modo positivo y el negativo, eso es, hacer el estudio de moléculas que al ionizar forman iones positivos o negativos al mismo tiempo. Por otra parte, también permite hacer MSⁿ, es decir, el estudio de las roturas que sufre un ion cuando se le proporciona energía, lo cual aporta información estructural y de conectividad de la molécula.

Casos prácticos.

Determinación de la pureza enantiomérica

Ejemplo concreto: Determinación de la separación enantiomérica conseguida mediante la utilización de MOFs especialmente diseñados para enriquecer enantioméricamente productos racémicos. Más información: "Engineering Homochiral Metal–Organic Frameworks by Spatially Separating 1D Chiral Metal–Peptide Ladders:Tuning the Pore Size for Enantioselective Adsorption", Chem. Eur. +34 2015 21 9964 -9969  

Cuantificación de productos y estudios mecanísticos mediante marcaje isotópico

En este caso, además de cuantificar los productos obtenidos en una reacción, se ha utilizado el HPLC-MS para estudiar la composición isotópica de los productos obtenidos. De esta manera, en el caso de haber utilizado reactivos marcados isotópicamente, podremos saber si estos han acabado formando parte del producto de la reacción y en qué medida. Los productos marcados isotópicamente son aquellos que contienen átomos con una distribución isotópica diferente a la que se encuentra a la naturaleza. Por ejemplo, lo son los productos que contienen ¹⁸O, ya que el isótopo más abundante del oxígeno es el¹⁶O. Por lo tanto, la presencia de¹⁸O con abundancias superiores al 0.2% implica la participación en la reacción de los productos marcados isotópicamente introducidos. Los estudios de marcaje isotópico son una fuente muy importante deinformación mecanística. Más información: Angew. Chem. Int. Ed., 2014, 53(36), 9608–9612.

Caracterización de moléculas orgánicas y complejos con metales de transición con ESI-MS

El espectrómetro de masas se puede utilizar en solitario con el fin de caracterizar tanto moléculas orgánicas como complejos de metales de transición. Ejemplo concreto: Caracterización de la molécula [LFeO(CF₃SONIDO₃)]⁺  mediante ESI-MS (m/z= 546.1) y confirmación de la presencia del grupo Fe=O mediante el seguimiento del intercambio del grupo oxo con H₂¹⁸O. Más información en: "Triggering the Generation of an Iron(IV)-Oxo Compound and Its Reactivity toward Sulfides by RuII Photocatalysis". J. Am. Chem. Soy.,2014 136 4624 -4633.